1.供試昆(kun)蟲(chong)本(ben)試驗(yan)研究的(de)昆(kun)蟲(chong)樣本(ben)為亞洲小車蝗（Oedaleusasiaticus）成蟲(chong)，均采(cai)自內蒙古(gu)錫林(lin)郭勒盟(meng)多倫縣農牧交錯(cuo)區草原，用(yong)養蟲(chong)籠活體帶回實驗(yan)室進(jin)行(xing)處理(li)保存。

2.液(ye)氮速(su)凍處理取10頭活的亞洲小(xiao)車(che)蝗單(dan)頭裝(zhuang)入(ru)離心管中，將離心管放入(ru)液(ye)氮中速(su)凍處理3min，取出后在室溫條(tiao)件下放置12h觀察(cha)亞洲小(xiao)車(che)蝗存活情(qing)況。

3.樣本保存方法

（1）液氮速凍后保(bao)存將采集帶回實驗(yan)室(shi)的活體(ti)蝗蟲樣本單頭裝入離心管中，將離心管放入液氮中速凍處理3min，取出后放入-40℃冰(bing)箱(xiang)中保(bao)存備用。

（2）直接冷凍保存(cun)將采集帶回實驗室的活(huo)體蝗蟲樣本單(dan)頭(tou)裝入(ru)離心管中(zhong)，直接放入(ru)-40℃冰箱中(zhong)保存(cun)備用。

（3）乙醇保存將采集帶回實驗(yan)室的活體蝗蟲樣(yang)本放(fang)入(ru)無水乙醇（分析(xi)純）中保存備用。

（4）干(gan)制標(biao)(biao)本(ben) 將采集帶回來(lai)的活體亞洲小車(che)蝗樣本(ben)放入(ru)毒(du)瓶中(zhong)毒(du)死(si)后，針插保(bao)存于標(biao)(biao)本(ben)室中(zhong)，待風干(gan)后進行DNA提取試驗。

4.DNA的(de)提(ti)取(qu)(qu)將上述4種(zhong)方(fang)法(fa)保存的(de)蝗(huang)蟲樣本在3個月后(hou)進(jin)行(xing)DNA提(ti)取(qu)(qu)試(shi)驗。分(fen)別選用單頭亞洲小車蝗(huang)的(de)后(hou)足股(gu)(gu)節(jie)，無水乙醇（分(fen)析(xi)純）保存的(de)蝗(huang)蟲后(hou)足股(gu)(gu)節(jie)需在提(ti)取(qu)(qu)之前先用無菌去離子水沖洗2～3次，將蝗(huang)蟲股(gu)(gu)節(jie)放入研(yan)缽(bo)中用液氮研(yan)磨成(cheng)粉并移(yi)入1.5mL離心管中，然后(hou)使用天根dp304動物基(ji)因組DNA提(ti)取(qu)(qu)試(shi)劑盒參照(zhao)說明書(shu)步驟進(jin)行(xing)基(ji)因組DNA提(ti)取(qu)(qu)。

5.DNA電泳檢測(ce)用1%的(de)瓊脂糖凝(ning)(ning)膠電泳對提取的(de)蝗蟲基(ji)因組DNA進行檢測(ce)。取DNA樣(yang)品3μL、上樣(yang)緩沖液2μL混勻后加入凝(ning)(ning)膠時預留的(de)點樣(yang)孔中(zhong)，加入DL2000Marker（TaKaRa；第3條(tiao)帶為150ng/μL），經過100V恒壓電泳20min，使用紫外凝(ning)(ning)膠成像系(xi)統觀察基(ji)因組DNA提取情況(kuang)并拍照(zhao)保存(cun)。